Las propiedades angiogénicas mejoradas de la sangre del cordón umbilical preparada con células estromales OP9 mejoran los déficits neurológicos en un modelo de ratón con infarto cerebral

Scientific Reports volumen 13, Número de artículo: 262 (2023) Citar este artículo

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El trasplante de sangre de cordón umbilical (UCB) muestra efectos proangiogénicos y contribuye a la mejora de los síntomas en modelos animales de infarto cerebral. Sin embargo, el efecto de tipos de células específicos dentro de una población UCB heterogénea sigue siendo controvertido. OP9 es una línea de células estromales que se utiliza como células alimentadoras para promover la diferenciación hematoendotelial de las células madre embrionarias. Por lo tanto, investigamos los cambios en las propiedades angiogénicas, los mecanismos subyacentes y el impacto en las deficiencias conductuales causadas por el infarto cerebral en UCB cocultivado con OP9 durante un máximo de 24 h. En el ensayo de formación de red, solo OP9 preacondicionó UCB formó estructuras de red. La secuenciación de ARN de una sola célula y el análisis de citometría de flujo mostraron un cambio fenotípico prominente hacia M2 en la fracción monocítica de UCB preacondicionado OP9. Además, el trasplante de UCB preacondicionado con OP9 en modelos de ratones con infarto cerebral facilitó la angiogénesis en las lesiones periinfarto y mejoró los síntomas asociados. En este estudio, desarrollamos un método fuerte, rápido y factible para aumentar las características proangiogénicas M2, protectoras de tejidos, de UCB usando OP9. El efecto de mejora de la UCB precondicionada con OP9 in vivo podría deberse en parte a la promoción de la angiogénesis innata en las lesiones periinfarto.

El infarto cerebral es una de las principales causas de discapacidad permanente y muerte. Actualmente, los agentes trombolíticos intravenosos y la terapia de recanalización endovascular se emplean ampliamente en la fase aguda para prevenir la penumbra isquémica. Sin embargo, estas terapias tienen ventanas de tiempo estrechas y las indicaciones terapéuticas se limitan a una población específica de pacientes1. Por lo tanto, la innovación terapéutica para el infarto cerebral es necesaria y altamente exigente.

En comparación con las terapias de reperfusión convencionales, se espera que la terapia celular sea una terapia de aplicación más amplia para el infarto cerebral en el futuro2, porque tiene el potencial de mejorar los síntomas asociados incluso cuando se administra durante las fases subaguda o crónica3.

Estudios previos han sugerido que la sangre del cordón umbilical (UCB) y la sangre periférica (PB) de adultos contienen una cierta fracción mononuclear que puede acumularse en los sitios de angiogénesis activa y contribuir a la neovascularización4,5. Asahara et al. describió por primera vez que la población de células hematopoyéticas CD34+ clasificada a partir de células mononucleares derivadas de PB humano (PB-MNC) podría producir células en forma de huso con el marcador hematopoyético universal CD45 al sembrarlas en placas recubiertas de fibronectina y podría promover la neovascularización en un modelo de isquemia de las extremidades posteriores6 . Resultados similares fueron reportados por Kalka et al. utilizando células mononucleares adherentes primarias sin clasificación de CD347.

Desde entonces, la población de células proangiogénicas dentro de la población heterogénea de fracción de células mononucleares se ha investigado ampliamente. Se ha demostrado que las células monocíticas CD14+CD45+ en progenitores hematopoyéticos CD34+CD45+ en UCB o PB forman grupos de células similares a los informados por Asahara8, mientras que otros estudios informaron que la fracción monocítica CD34-CD14+ de PB tenía características similares9,10. Mientras tanto, se ha demostrado que una población de células proangiogénicas se origina a partir de progenitores mieloides y progenitores de granulocitos-macrófagos11. Estos hallazgos están de acuerdo con la noción bien conocida de que los monocitos tienen una variedad de diferentes fenotipos funcionales (es decir, M1 y M2) y que los monocitos M2 están asociados con la angiogénesis12, así como con la promoción de la neurogénesis, el brote axonal y la remielinización13, mientras que los M1 los monocitos son proinflamatorios y median el daño tisular.

De hecho, se ha demostrado que dichas fracciones celulares facilitan la revascularización de tejidos isquémicos como el miembro posterior isquémico y en el infarto de miocardio14,15. Además, se sabe que la angiogénesis se correlaciona positivamente con la recuperación neurológica después de un infarto cerebral16. Varios estudios demostraron que el trasplante de UCB mostró efectos proangiogénicos y contribuyó a una reducción en el volumen isquémico o mejoría de los síntomas en modelos animales de infarto cerebral17,18,19. Sin embargo, la mayoría de estos estudios utilizaron células mononucleares crudas UCB17,19,20 o derivadas de UCB18,21 similares a las reportadas por Kalka et al. Además, la eficacia de las células CD34+ clasificadas a partir de células mononucleares derivadas de UCB6 en un modelo de infarto cerebral es controvertida21,22.

Estos hallazgos nos llevaron a plantear la hipótesis de que el aumento de poblaciones de células proangiogénicas más específicas en UCB conduce a efectos terapéuticos mejorados. Sobre la base de esta hipótesis, nos centramos en las características de OP9, una línea de células estromales, que se utilizó inicialmente como línea de células alimentadoras para promover la diferenciación eritroide, mieloide y linfoide de células madre embrionarias23. También se sabe que facilita la diferenciación en células endoteliales y hematopoyéticas a partir de una población celular derivada del sitio hematopoyético intraembrionario prehepático24. Además, recientemente se informó en varios órganos de una determinada población de células progenitoras endoteliales derivadas de la superficie interna de los vasos sanguíneos. OP9 promovió efectivamente su expansión, formación de colonias y diferenciación en células endoteliales maduras25. Por lo tanto, OP9 podría ser adecuado para mejorar las propiedades angiogénicas de UCB.

En este estudio, establecimos un nuevo método de cultivo para células UCB cebadas con OP9. Investigamos si este método de 'preacondicionamiento' de UCB podría mejorar sus propiedades angiogénicas e identificar los mecanismos subyacentes y el impacto de UCB preacondicionado con OP9 en las deficiencias conductuales causadas por un infarto cerebral focal experimental en un modelo de ratón mediante oclusión quirúrgica. de la arteria cerebral media (MCAO).

Los ensayos de formación de redes in vitro en Matrigel se han utilizado durante mucho tiempo para evaluar la capacidad proangiogénica de las células cultivadas5,8,10,26,27,28,29. Para evaluar las características proangiogénicas de las células UCB, realizamos el ensayo utilizando PB-MNC, células UCB y células UCB preacondicionadas OP9 (Fig. 1a). Sorprendentemente, después de un cocultivo corto dentro de las 24 h, las células UCB preacondicionadas con OP9 formaron estructuras similares a capilares, mientras que tales estructuras no se observaron en las células UCB sin preacondicionamiento (Fig. 2a, b). Cuando se incubaron con células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC), las células UCB preacondicionadas OP9 formaron estructuras de red gruesas y sólidas heterogéneamente alineadas con HUVEC, mientras que las células UCB sin preacondicionamiento OP9 no lograron formar tal alineación estructural con HUVEC (Fig. 2c ,d). En comparación con las células UCB preacondicionadas con OP9, las HUVEC también formaron una estructura de red delgada y débil por sí mismas (Fig. 2e). Se usaron PB-MNC como controles, que no lograron formar estructuras similares a capilares con HUVEC incluso después del preacondicionamiento de OP9 (Fig. 2f). Las células OP9 solas no formaron estructuras de tipo capilar (datos no mostrados).

Representaciones esquemáticas metodológicas para el estudio. ( a ) Protocolo para el ensayo de formación de redes. Células de sangre de cordón umbilical humano (UCB) empobrecidas en glóbulos rojos y células mononucleares derivadas de sangre periférica (PB-MNC) se cocultivaron en células estromales OP9 (es decir, preacondicionamiento de OP9) en placas de 10 cm. Después de 18 a 24 h de cultivo, las células adherentes se recolectaron y se sometieron a un ensayo de formación de redes in vitro. Se usaron como control células UCB crudas empobrecidas en glóbulos rojos y PB-MNC cultivadas en placas recubiertas con fibronectina. ( b ) Protocolo para la secuenciación de ARN de células individuales (scRNA-seq) y citometría de flujo. Se usaron células UCB crudas empobrecidas en RBC como control. ( c ) Protocolo para la administración intravenosa de UCB preacondicionado OP9 en el modelo de ratón MCAO. Los ratones se asignaron aleatoriamente a tres grupos de la siguiente manera: el grupo UCB + OP9 (n = 11); el grupo de control (n = 11); y el grupo de cirugía simulada (n = 12) y se sometió a MCAO o cirugía simulada. Dos semanas después de la cirugía, los ratones del grupo UCB + OP9 recibieron 100 μl de UCB preacondicionado con OP9 (2,0 × 107 células/kg) y los ratones del grupo de control recibieron la misma cantidad de solución de Ringer lactato por vía intravenosa (iv). Un mes después del trasplante de células, se realizaron una serie de pruebas de comportamiento y, tres meses después del trasplante de células, cinco ratones del grupo UCB + OP9 y cinco ratones del grupo de control se seleccionaron al azar y se sometieron a inmunohistoquímica.

Ensayo de formación de redes in vitro con células adherentes derivadas de UCB o PB-MNC con o sin preacondicionamiento de OP9. Los nombres de panel de (a–f) son idénticos a los de (a–f) en la Fig. 1a. Las células adherentes derivadas de UCB o PB-MNC con o sin preacondicionamiento de OP9 se sembraron en Matrigel. Se agregaron células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC) en los paneles (c)-(f). ( a ) Células UCB preacondicionadas con OP9 que muestran estructuras similares a capilares. ( b ) Células UCB sin preacondicionamiento OP9. ( c ) Células UCB preacondicionadas OP9 con HUVEC. ( d ) HUVEC y células UCB sin preacondicionamiento OP9. (e) HUVEC solos (sin preacondicionamiento OP9). ( f ) PB-MNC preacondicionadas con OP9 cocultivadas con HUVEC. Barra de escala: 100 μm, 10 aumentos.

Por lo tanto, el preacondicionamiento de OP9 aumentó las características proangiogénicas de las células UCB dentro de las 24 h, que no se indujeron en las PB-MNC.

Las células UCB contienen poblaciones de células heterogéneas, por lo que es necesario aclarar los tipos de células afectadas por el preacondicionamiento de OP9. Se utilizó la secuenciación de ARN de una sola célula (scRNA-seq) para evaluar los cambios en el perfil de expresión genética de cada población celular, donde comparamos las células UCB preacondicionadas OP9 y las células UCB crudas (Fig. 1 complementaria). Se empleó el agrupamiento no supervisado mediante la incrustación de vecinos estocásticos distribuidos en t (tSNE) para organizar todas las células UCB en grupos transcripcionalmente distintos e identificar los genes marcadores expresados diferencialmente en cada grupo. Surgió un total de 25 grupos estables, incluidos grupos de monocitos, granulocitos, células madre hematopoyéticas y progenitores mieloides y granulocitos-macrófagos comunes (CMP/GMP), que se sabe que tienen efectos proangiogénicos (Figura complementaria 1). En los datos complementarios se proporciona una lista de los genes expresados preferentemente en cada tipo de célula. Un diagrama de violín y un mapa de distribución de la expresión génica de CD14 y CGR3A, genes que se considera que se expresan preferentemente en monocitos, sugirieron que las células en el grupo 4 estaban compuestas principalmente por monocitos (Fig. 1 complementaria). La fracción monocítica fue considerablemente mayor en las células UCB preacondicionadas OP9 que en las células UCB crudas (8,0 % frente a 5,3 %), mientras que el recuento de células madre hematopoyéticas y CMP/GMP no cambió (0,6 % frente a 1,1 %). % y 0,6% frente a 0,4%, respectivamente) (Figura 1 complementaria).

Los monocitos fenotípicos M1 son proinflamatorios y median el daño tisular, mientras que el fenotipo M2 está asociado con la angiogénesis. Por lo tanto, nos enfocamos en las características de expresión génica del grupo monocítico. Los mapas de calor de los genes característicos M1 y M2 típicos mostraron una clara tendencia del perfil de expresión génica, donde los genes marcadores M2, como el factor de activación de macrófagos (MAF) y CD163, se expresaron abundantemente en el grupo monocítico de UCB preacondicionado OP9, mientras que la expresión del gen específico de M1 fue mayor en la de UCB crudo (Fig. 3a). Estos hallazgos sugieren que el grupo monocítico de UCB preacondicionado OP9 se desplazó hacia el fenotipo M2 en comparación con el de UCB crudo.

Secuenciación de ARN unicelular (scRNA-seq) y análisis de citometría de flujo de células UCB crudas y UCB preacondicionadas OP9. ( a ) Mapas de calor de genes típicos de firma M1 y M2. La barra lateral derecha muestra los genes distintivos M1 y M2 en azul y rojo respectivamente. La barra de escala indica los niveles de expresión génica calculados a partir de recuentos de índice molecular único (UMI) logarítmicamente normalizados (factor de escala = 10 000). ( b ) Análisis de enriquecimiento de ontología génica (GO) de genes expresados diferencialmente entre UCB crudo y UCB + OP9. Los términos GO enriquecidos se identificaron con base en la prueba hipergeométrica y los valores de p ajustados se derivaron mediante el método de Benjamini y Hochberg (BH). Los 15 principales términos GO enriquecidos se mostraron de acuerdo con el valor de p -log10. ( c, d ) Análisis de citometría de flujo de UCB y UCB + OP9. La viabilidad celular (la relación de células vivas con respecto a todos los eventos) se analizó mediante tinción con DAPI. Las células en la fracción monocítica (población P1) se bloquearon en función de las características de dispersión de luz de ángulo frontal (FSC) y dispersión de luz de ángulo lateral (SSC). Luego, se usaron CD80 y CD206 para clasificar las células de tipo M1 y M2 en los cuadrantes Q4 y Q1, respectivamente.

Además, el análisis de ontología génica (GO) de genes expresados diferencialmente entre el grupo monocítico de OP9 preacondicionado y UCB crudo reveló tendencias características del enriquecimiento del término GO. Los términos GO relacionados con la hipoxia, la glucólisis y las vías oxidativas tuvieron los valores p de enriquecimiento más altos (Fig. 3b). Estos hallazgos están en concordancia con los resultados de los mapas de calor en términos de cambios metabólicos intracelulares, considerando que la hipoxia desplaza a los monocitos hacia el fenotipo M1 en el que la energía se obtiene principalmente a través de la glucólisis, mientras que en los monocitos M2 a través de vías oxidativas30. Para investigar más a fondo los mecanismos proangiogénicos en la fracción monocítica, comparamos los perfiles de expresión génica asociados con la regulación de la migración celular involucrada en la angiogénesis germinativa (GO: 0090049) en grupos monocíticos de UCB precondicionado con OP9 y UCB crudo. Los genes estaban ampliamente regulados al alza en el grupo monocítico de UCB precondicionado con OP9 (Tabla 1). Entre estos genes, la expresión de neuropilina-1 (Nrp1) se mejoró en la fracción monocítica preacondicionada con OP9 en comparación con la de UCB crudo. Nrp1 es un receptor transmembrana que se une a VEGF165 y semaforina de clase 3 y se sabe que se expresa en una determinada población proangiogénica de monocitos (es decir, monocitos que expresan neuropilina-1; NEM)31. Por lo tanto, los mecanismos proangiogénicos de la fracción monocítica preacondicionada con OP9 podrían explicarse parcialmente por el aumento de NEM por el preacondicionamiento de OP9.

Para reforzar los resultados de scRNA-seq, investigamos el cambio fenotípico M1/M2 de estas dos fracciones monocíticas mediante análisis de citometría de flujo. En primer lugar, evaluamos la viabilidad de las células UCB mediante tinción con 4',6-diamino-2-fenilindol (DAPI), que reveló una mayor viabilidad de las células UCB en UCB preacondicionado con OP9 que en UCB crudo (96,1 % frente a 81,3 %). % de todos los eventos; Fig. 3c), lo que sugiere el efecto protector de OP9. Se utilizaron CD80 y CD206 para diferenciar los monocitos M1 y M232,33. El porcentaje de recuento de células de tipo CD80-CD206+ M2 fue mucho mayor en la fracción monocítica de UCB preacondicionado con OP9 en comparación con la de UCB crudo (27,9 % frente a 1,7 %; cuadrante Q1 en la Fig. 3c), mientras que el porcentaje de las células monocíticas totales fueron comparables tanto en células derivadas de UCB preacondicionadas OP9 como en células crudas (3,3% frente a 2,2% de todas las células vivas; población P2 en la Fig. 3c).

Además, también observamos una tendencia prominente de cambio M1-M2 en PB-MNC debido al preacondicionamiento OP9. El porcentaje de células CD80− CD206+ fue sustancialmente mayor (43,0 % frente a 7,6 %; cuadrante Q1 en la Fig. 3d), mientras que el de células CD80+ CD206− fue menor (3,3 % frente a 11,4 %; cuadrante Q4 en la Fig. 3d) en la fracción monocítica de las PB-MNC preacondicionadas con OP9 en comparación con la de las PB-MNC crudas (Fig. 3d).

En varios grupos granulocíticos de scRNA-seq, la fracción de granulocitos fue mayor en las células UCB preacondicionadas con OP9 que en las células UCB crudas (granulocitos_3,4 y _5, Fig. 1 complementaria). Al igual que los monocitos, también se sabe que los neutrófilos tienen un fenotipo N2 que induce la angiogénesis34. Por lo tanto, realizamos el mismo análisis de citometría de flujo en la fracción granulocítica (población P2 controlada por las características de SSC y FSC en la Fig. 2 complementaria). Sin embargo, las células de tipo CD80-CD206 + N2 solo se encontraron en el 0, 12% de la fracción granulocítica en UCB preacondicionado OP9 (cuadrante Q1 en la Fig. 2 complementaria).

En general, el preacondicionamiento de OP9 de 24 h de tiempo corto cambió fuertemente las características fenotípicas de la fracción monocítica en células UCB y PB-MNC hacia el estado dominante M2, así como su efecto protector en términos de viabilidad de células UCB.

El efecto proangiogénico de las células UCB preacondicionadas OP9 se evaluó mediante administración intravenosa en el modelo de ratón MCAO. El proceso de reparación, principalmente la angiogénesis, ocurre en la fase subaguda después del infarto cerebral35,36. Por lo tanto, administramos células UCB preacondicionadas OP9 2 semanas después de la inducción de MCAO para mejorar el proceso angiogénico y sacrificamos estos ratones MCAO 3 meses después de la administración de UCB (Fig. 1b), considerando que se informó la densidad de microvasos en la lesión periinfarto alcanza su punto máximo el día 30 y disminuye gradualmente en 3 meses37. Las observaciones morfológicas en el infarto isquémico focal fueron similares a las reportadas en el informe anterior38, con pequeñas arterias en la superficie cerebral del infarto isquémico y microvasos en la lesión periinfarto ubicada en la periferia del infarto isquémico adyacente a la corteza normal y cuerpo estriado (Fig. 4a). Evaluamos la densidad de microvasos en la lesión periinfarto mediante la medición del área y el recuento de células CD31+/vWF+ (factor de von Willebrand). El área doblemente positiva de CD31/vWF fue significativamente mayor en el grupo al que se administró UCB preacondicionado con OP9 (n = 5) que en el control con vehículo (n = 5) (***p < 0,001; Fig. 4b,c ). Este resultado sugiere que las células UCB preacondicionadas OP9 tenían efectos proangiogénicos destacados en la lesión periinfarto de ratones MCAO en comparación con las células UCB crudas.

Tinción de vWF y CD31 en la lesión periinfarto de ratones MCAO con o sin administración de UCB preacondicionada con OP9. La inmunohistoquímica fluorescente se realizó 3,5 meses después de la cirugía (n = 5 en el grupo UCB + OP9 y n = 5 en el grupo control, respectivamente). (a) Ilustración esquemática de la región diana para la medición del área de células positivas dobles CD31/vWF (factor de von Willebrand) mediante un microscopio de fluorescencia. Se analizó una sección coronal por ratón (n = 5 en cada grupo). Se observaron pequeñas arterias en la superficie del cerebro del infarto isquémico (‡) y microvasos en la lesión periinfarto ubicada en la periferia del infarto isquémico adyacente a la corteza normal y el cuerpo estriado (†). Se analizaron tres campos visuales aleatorios no superpuestos de (†) indicados por cuadros rojos sólidos (400 aumentos) por sección coronal para medir el área doblemente positiva de CD31/vWF. ( b ) Imágenes representativas de tinción inmunofluorescente de secciones de cerebro. Las células doblemente positivas CD31/vWF (amarillo) con CD31+ (verde) y vWF+ (rojo) en las lesiones periinfarto (†) se sometieron al análisis en (c). Los núcleos se contrastaron usando DAPI (azul). Barra de escala: 50 μm. Aumento de 200 ×. (c) La medición del área y el recuento de células CD31+/vWF+ por campo observado con un aumento de 400 × (n = 15 por cada grupo). ***p < 0,001, prueba t no pareada.

Finalmente, realizamos pruebas de comportamiento en ratones MCAO para evaluar los efectos de UCB preacondicionado con OP9 en la mejora de las alteraciones neurológicas causadas por infarto cerebral. Se realizaron pruebas de comportamiento 1,5 meses después de la cirugía y se compararon dentro de tres grupos [el grupo UCB + OP9 (n = 11), el grupo de control (n = 11) y el grupo de cirugía simulada (n = 12)], como se muestra en la Fig. 1c.

Antes de las comparaciones múltiples, se realizó un análisis de varianza (ANOVA) de una vía para la tarea del laberinto en Y, donde mostró significancia [F(2) = 19.35, p < 0.0001]. Además, un ANOVA bidireccional de medidas repetidas (rmANOVA) (es decir, la prueba de campo abierto, la tarea de aprendizaje de evitación pasiva y la prueba de natación forzada) reveló significación en los grupos en todas las tareas [F(2, 32) = 10,60, p < 0,0003; F(2, 32) = 6,08, p = 0,0058; F(2, 32), p < 0,0001, respectivamente], así como en el efecto temporal de la tarea de aprendizaje de evitación pasiva [F(2, 31) = 14,48, p < 0,0001] y la interacción grupo por tiempo en la tarea de aprendizaje forzado. prueba de natación [F(10, 160) = 3,179, p = 0,001]. Sin embargo, rmANOVA en la prueba de alambre colgado no mostró significancia.

Para comparaciones múltiples, primero, comparamos los grupos de control y cirugía simulada para evaluar si la inducción de MCAO afectó el puntaje de cada prueba de comportamiento y si estas pruebas eran adecuadas para detectar funciones neurológicas anormales causadas por MCAO. En la prueba de campo abierto, la distancia recorrida en el grupo de control fue significativamente mayor que la del grupo de cirugía simulada a lo largo de la duración del experimento, lo que refleja una falta anormal de habituación y ansiedad en el grupo de control (*p < 0,05, **p < 0,01 , ***p < 0,001, figura 5a). Aunque el efecto del tiempo en rmANOVA no fue estadísticamente significativo, se observó una tendencia hacia una disminución dependiente del tiempo en la distancia recorrida en el grupo de cirugía simulada, lo que indica una reacción de habituación normal en la prueba de campo abierto. En la tarea del laberinto en Y, la tasa de alternancia disminuyó significativamente en el grupo de control en comparación con el grupo de cirugía simulada, lo que sugirió un deterioro en la memoria de trabajo en el grupo de control (* p <0.05; Fig. 5b). Además, en la tarea de aprendizaje de evitación pasiva, la latencia paso a paso se alargó en el grupo de cirugía simulada después de cada día de prueba, mientras que en el grupo de control no cambió, lo que indica que los ratones en el grupo de cirugía simulada adquirieron con éxito el comportamiento de evitación, pero los ratones del grupo de control no lo hicieron, lo que puede atribuirse al deterioro de la memoria nociceptiva (††p < 0,01, *p < 0,05, Fig. 5c). La prueba de natación forzada mostró que los ratones del grupo de cirugía simulada tenían un tiempo de inmovilidad más corto que los ratones del grupo de control, lo que indica el desarrollo de una pérdida de motivación y un deterioro de la tolerancia al ejercicio en ratones MCAO (**p < 0,01, *** p < 0,001; figura 5e).

Pruebas de comportamiento para ratones MCAO con o sin administración de UCB preacondicionada con OP9. Los ratones se asignaron aleatoriamente a tres grupos: el grupo UCB + OP9 (n = 11), el grupo de control (n = 11) y el grupo de cirugía simulada (n = 12). La prueba de campo abierto (a), la tarea de laberinto en Y (b), la prueba de aprendizaje de evitación pasiva (c), la prueba de suspensión del cable (d) y la prueba de natación forzada se realizaron 1,5 meses después de la cirugía. Antes de las comparaciones múltiples, se realizó un análisis de varianza unidireccional para la tarea del laberinto en Y y un ANOVA de medidas repetidas bidireccionales para los datos que surgen de medidas repetidas (es decir, la prueba de campo abierto, la tarea de aprendizaje de evitación pasiva, la prueba de colgar cables y la prueba forzada). prueba de natación). A; p < 0,05, prueba de Dunnett para diferencias entre sujetos. *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, prueba de Dunnett en comparación del grupo de cirugía simulada con el grupo de control (es decir, el grupo inducido con MCAO). #p < 0,05, ##p < 0,01, prueba de Dunnett en comparación del grupo OP9 + UCB (es decir, el grupo inducido con MCAO y administrado con UCB preacondicionado con OP9) con el grupo de control. †p < 0,05, ††p < 0,01, prueba de Dunnett comparada con las pruebas de acondicionamiento de cada grupo.

A continuación, comparamos los grupos de control y OP9 + UCB para investigar los efectos de mejora de las células UCB preacondicionadas OP9 en las puntuaciones de tareas conductuales. Las puntuaciones en la prueba de campo abierto, la prueba del laberinto en Y, la tarea de aprendizaje de evitación pasiva y la prueba de natación forzada fueron significativamente mejores en el grupo OP9 + UCB que en el grupo de control (#p < 0,05, ##p < 0,01, † † p < 0,01). En la prueba de suspensión del cable, no pudimos detectar diferencias significativas entre los tres grupos (Fig. 5d), porque se sabe que nuestro modelo MCAO muestra una recuperación rápida de los déficits motores focales y no siempre es suficiente para detectar efectos de mejora en la función motora39,40 . Sin embargo, hubo una tendencia de que la inducción de MCAO acortó la latencia hasta la caída (es decir, más corta en el grupo de control que en el grupo de cirugía simulada) y mejoró con la administración de células UCB preacondicionadas con OP9 (es decir, más larga en el grupo de control). grupo OP9 + CUB que en el grupo de control), lo que sugiere el efecto de mejora de las células UCB preacondicionadas con OP9 en la debilidad muscular y la tolerancia al ejercicio. Por lo tanto, estos resultados indican que las anomalías de comportamiento causadas por MCAO, como la actividad general, el deterioro de la memoria, la tolerancia al ejercicio y los síntomas similares a la depresión, mejoraron con la administración de células UCB preacondicionadas OP9.

El estudio actual demostró que OP9 aumentó fuerte y rápidamente las características proangiogénicas de las células UCB (Fig. 2), en parte cambiando su fenotipo en la fracción monocítica hacia un estado angiogénico M2 dominante (Fig. 3). También se demostró que la administración intravenosa subaguda de células UCB preacondicionadas OP9 mejoró los déficits neurológicos en el modelo de ratón MCAO (Fig. 5), en parte debido a la promoción de la angiogénesis innata en las lesiones periinfarto (Fig. 4). Hasta donde sabemos, este es el primer estudio que informa una técnica de modificación fuerte, fácil y rápida para UCB para aumentar sus características proangiogénicas y verificar sus efectos biológicos en un modelo de infarto cerebral subagudo.

Asahara et al. describió por primera vez la nomenclatura de células progenitoras endoteliales (EPC), una población celular circulante que puede contribuir a la neovascularización al acumularse en los sitios de angiogénesis activa6. En el ensayo de cultivo celular in vitro, se informan dos poblaciones de EPC diferentes: EPC tempranas y tardías, las primeras también se denominan células angiogénicas mieloides (MAC) o células hematopoyéticas proangiogénicas, mientras que las últimas también se denominan células formadoras de colonias endoteliales ( ECFC) o células de crecimiento endotelial41,42. Ambos eran células adherentes aisladas de PB-MNC sembradas en placas recubiertas de fibronectina o colágeno en condiciones de cultivo de células endoteliales, pero diferían en el tiempo de aparición en el cultivo26,29,43,44. Originalmente, se informó que la EPC temprana era una población de células fusiformes que emergía a las 2–3 semanas y cesaba a las 4 semanas, mientras que la EPC tardía era una población de células con forma de adoquín que emergía a las 2–3 semanas, crecía exponencialmente a las 4–8 semanas y tenía capacidad de múltiples duplicaciones poblacionales sin senescencia27. Las ECFC tienen características progenitoras endoteliales específicas, como una capacidad proliferativa significativa, un potencial de formación de redes en Matrigel y la capacidad de contribuir a la formación de vasos sanguíneos de novo in vivo26,29,45. Por el contrario, los MAC no comparten ninguna de las propiedades de los ECFC, pero tienen características monocíticas derivadas de la hematopoyética (es decir, expresión de marcadores de células progenitoras mieloides y la capacidad de diferenciarse en macrófagos) y promueven la angiogénesis a través de un mecanismo paracrino12,43,44,45 ,46.

Con base en estudios previos, los MAC contienen una fracción de monocitos y poseen características similares con poblaciones celulares ampliamente utilizadas para terapias celulares para promover la angiogénesis14. Nuestras células UCB preacondicionadas OP9 también contienen una fracción de monocitos que posee las características de los MAC, como efectos proangiogénicos a través de un mecanismo paracrino. Sin embargo, en el ensayo de formación de red, las células UCB preacondicionadas OP9 formaron una estructura de red y se alinearon heterogéneamente con HUVEC, mientras que las PB-MNC no formaron una estructura de red, aunque tanto las PB-MNC como las células UCB cambiaron hacia el fenotipo M2 mediante el uso de Preacondicionamiento OP9. Por lo tanto, parece apropiado interpretar nuestros hallazgos en el ensayo de formación de redes de la siguiente manera: (i) nuestro preacondicionamiento de OP9 desplazó la fracción de monocitos en las células UCB hacia el fenotipo M2 y mejoró sus efectos proangiogénicos, (ii) estos los monocitos no se diferenciaron en células endoteliales, y (iii) el preacondicionamiento de OP9 podría promover otra población indefinida en células UCB para participar y alinearse en la estructura central de la red de manera heterogénea con HUVEC, respaldada por monocitos proangiogénicos desplazados por M2 circundantes. Informes anteriores demostraron que los MAC y ECFC tenían un efecto sinérgico sobre la neovascularización43 y las células mononucleares derivadas de UCB no fraccionadas fueron superiores a las fracciones de células CD34+ o CD34- en términos de sus efectos sobre la reducción del volumen del infarto y la mejora de los déficits neurológicos21. Por lo tanto, estos hallazgos sugieren que nuestro método que utiliza células UCB no fraccionadas cocultivadas con OP9 sería un mejor enfoque para aumentar las características angiogénicas, en las que OP9 contenía y modulaba simultáneamente varias poblaciones de células innatas relacionadas con la angiogénesis sin aislar una población celular específica.

Entre las diversas fuentes de células, UCB tiene algunas ventajas en la aplicación clínica como fuente donante de terapia celular, especialmente cuando tiene como objetivo la neovascularización. Primero, UCB contiene células madre con un alto potencial de proliferación47. En segundo lugar, la UCB contiene una mayor cantidad de poblaciones de células proangiogénicas que la PB o la médula ósea48,49. En tercer lugar, el trasplante de UCB tiene una larga historia de empleo en clínicas50 y tiene una incidencia y gravedad más bajas de la enfermedad de injerto contra huésped que el trasplante de médula ósea51,52. Finalmente, la UCB se obtiene de manera menos invasiva y fácil porque generalmente se desecha después del nacimiento y se ha establecido un sistema de suministro estable. Estas características respaldan aún más nuestro enfoque para el uso y la modulación de UCB en la terapia celular.

Varios estudios han demostrado que los macrófagos M2 pueden generarse mediante cultivo conjunto con células madre mesenquimales (MSC)53,54,55. Además, los sobrenadantes derivados de MSC podrían potenciar los macrófagos hacia un fenotipo antiinflamatorio, y la administración de tales "macrófagos educados" mejoró significativamente el proceso de curación de la lesión del tendón, redujo la proporción de macrófagos M1/M2 endógenos y promovió la angiogénesis56.

OP9 ha sido ampliamente conocido como una célula alimentadora para promover la diferenciación hematoendotelial, pero también se sabe que comparte algunas características con las MSC, incluido el inmunofenotipo, la capacidad de diferenciación y los efectos inmunomoduladores57. Los mecanismos subyacentes del preacondicionamiento de OP9 en las células UCB podrían atribuirse a través de la "educación de monocitos" en lugar de la diferenciación de células madre y progenitoras, considerando que cocultivamos UCB con OP9 durante solo 1 día, mientras que generalmente toma días obtener células mielomonocíticas. a través de la diferenciación de células madre embrionarias usando OP958.

Aunque no se aclararon los mecanismos moleculares proangiogénicos subyacentes de los monocitos con desplazamiento M2 in vivo, se obtuvo una visión interesante del perfil de expresión de la fracción monocítica en scRNA-seq. La expresión de Nrp1 se mejoró en la fracción monocítica preacondicionada con OP9 en comparación con la de UCB crudo. Recientemente, varios estudios han demostrado que (i) una cierta población de monocitos expresó Nrp1 como un receptor transmembrana (es decir, monocitos que expresan neuropilina-1; NEM), (ii) Nrp1 unido con VEGF165 y semaforina de clase 3, y mediado por quimioatracción de NEM hacia el sitio de la neoangiogénesis, y (iii) los NEM podrían reclutar células de músculo liso, promover la maduración de los vasos en la formación arterial y reducir la permeabilidad vascular anormal, aunque los NEM en sí mismos no se incorporaron a la estructura del vaso31,59,60,61.

El estudio actual tenía ciertas limitaciones. En primer lugar, no evaluamos la diferencia en el efecto sobre el accidente cerebrovascular isquémico entre el UCB preacondicionado y crudo de OP9. En segundo lugar, aunque está más allá del alcance de este manuscrito, es necesario evaluar el efecto de OP9 en poblaciones celulares distintas de la fracción monocítica, como las células progenitoras AC133+ derivadas de UCB5,62 o ECFC26 derivadas de UCB, así como T subconjuntos de células, que se ha informado que dificultan la recuperación neurológica después de un accidente cerebrovascular21,63. En este sentido, un análisis más detallado de los perfiles de expresión génica utilizando scRNA-seq puede proporcionar pistas para responder a estas preguntas. En tercer lugar, no verificamos el injerto de UCB administrado en el cerebro, ni investigamos si estas células derivadas de UCB se diferenciaron y participaron en la estructura de los tejidos reparados. Varios informes han demostrado el injerto de células derivadas de UCB18,20,62,64,65, mientras que algunos informes fallaron21,22. Además, su capacidad de diferenciación es controvertida. Las discrepancias en estos hallazgos se deben en parte a las diferencias en el cronograma de administración de UCB después del infarto (24 h a 1 semana después de MCAO), el análisis histológico (1 semana a 1 mes) y el método de detección de células UCB derivadas de humanos. No obstante, los mecanismos de mejora de los síntomas en el estudio actual pueden explicarse en parte por el efecto proangiogénico de las células UCB preacondicionadas con OP9 en el proceso de reparación de tejidos innato, que se informó anteriormente17,19,62.

Aunque existen estas limitaciones, nuestro método de preacondicionamiento OP9 aún se destaca en términos de sus características rápidas, convenientes y factibles, así como su fuerte efecto en la modulación de la bioactividad de UCB hacia M2, un fenotipo proangiogénico y protector de tejidos. .

En este estudio, encontramos un método fuerte y rápido para aumentar las características M2, proangiogénicas y protectoras de tejidos de UCB mediante el cultivo conjunto con OP9. Además, demostramos que la administración subaguda de UCB preacondicionado OP9 mejoró las deficiencias conductuales inducidas por MCAO en un modelo de ratón, en parte al promover la angiogénesis innata en lesiones periinfarto.

Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los donantes que proporcionaron UCB o PB, y el protocolo del estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Universidad Médica de Hyogo (número de aprobación 0325) y se realizó de acuerdo con la Declaración de Helsinki.

Las células OP9 se obtuvieron del Dr. Nobuyuki Takakura (Departamento de Transducción de Señales, Instituto de Investigación de Enfermedades Microbianas, Universidad de Osaka, Japón) y se mantuvieron en Medio Esencial Mínimo α con nucleósidos (Thermo Fisher Scientific, 41061-029; Waltham, MA) complementado con suero fetal bovino al 20% (Biowest, S1820; Nuaille, Francia) y penicilina-estreptomicina (Sigma-Aldrich, P7539; St. Louis, MO, EE. UU.).

Se compraron HUVEC derivadas de cordón umbilical humano de Lonza (C2517A; Basilea, Suiza) y se mantuvieron en medio EGM-2 (CC-3162; Lonza).

Los UCB y PB-MNC empobrecidos en glóbulos rojos se obtuvieron utilizando el reactivo de agotamiento de glóbulos rojos EasySep (Stem Cell Technologies, Vancouver, Canadá) y Ficoll-Paque PLUS (Cytiva, 17144002, MA) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las células se resuspendieron en DMEM/F12 (Thermo Fisher Scientific, 11330-032) complementado con factor de crecimiento epidérmico (Peprotech, AF100-15; Cranbury, NJ), factor de crecimiento de fibroblastos básico (Peprotech, 100-18B), N-2 ( Thermo Fisher Scientific, 17502048) y antibiótico-antimicótico (Thermo Fisher Scientific, 15240-062) y cocultivados en células estromales OP9 (es decir, preacondicionamiento OP9) en placas de cultivo de 10 cm a una densidad de 1 × 106 células /cm2. Después de 18 a 24 h de cultivo, las células no adherentes se eliminaron y las células adherentes se recolectaron mediante tripsinización, se lavaron una vez con medio y luego se sometieron a un ensayo de formación de red in vitro, análisis de citometría de flujo y administración intravenosa en el modelo de ratón. Para scRNA-seq, se usó una combinación de células adherentes y sobrenadantes derivadas de UCB empobrecido en RBC después del preacondicionamiento de OP9. Las células adherentes obtenidas de RBC eliminados UCB crudo cultivado en placas recubiertas de fibronectina se usaron como controles para el ensayo de formación de redes. Por el contrario, se usaron células UCB crudas empobrecidas en RBC y PB-MNC como control para scRNA-seq y/o análisis de citometría de flujo.

Se sembraron células adherentes derivadas de UCB o PB con o sin preacondicionamiento de OP9 en placas de cultivo de tejidos de 24 pocillos recubiertas con matriz Matrigel (Corning Inc., 354234; Corning, NY, EE. UU.) a una densidad de 1 × 105 células por Bueno. Se añadió DMEM (Thermo Fisher Scientific, 11885-084) con suero UCB al 5 % y, después de 24 h de incubación a 37 ℃ con CO2 al 5 %, se observaron las células con un microscopio invertido (BZ-X710, Keyence Corporation, Osaka, Japón). ; DMi8, Leica Microsystems, Watzler, Alemania) con un aumento de 10 × para la formación similar a un capilar, definida como estructuras de red interconectadas.

Para los experimentos de cocultivo, las HUVEC se marcaron con un kit de marcaje de membrana fluorescente roja (Sigma-Aldrich, MINI26) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las HUVEC se mezclaron con 1 × 105 células de células adherentes en Matrigel en una proporción de 1:5.

La construcción de bibliotecas de RNA-seq y la secuenciación de cDNA, incluido el aislamiento de células individuales, la preparación de cDNA, la construcción de bibliotecas de RNA-seq, la secuenciación de cDNA y el procesamiento, fueron realizadas por las instalaciones centrales de NGS del Genome Information Research Center en la Universidad de Osaka (Osaka, Estados Unidos). Japón). El análisis y la visualización gráfica derivados de scRNA-seq fueron realizados por Genble Inc. (Fukuoka, Japón). Los detalles se describen en el método complementario 3.

Las células se incubaron durante 20 min a 26 °C en la oscuridad con anticuerpos conjugados fluorescentes (como se indica en la Tabla 2) y se lavaron dos veces con PBS. Antes del análisis, las células se tiñeron para eliminar las células muertas utilizando solución Cellstain-DAPI (1:500, Dojindo, 340-07971; Kumamoto, Japón). Después de la tinción, las células se resuspendieron en 500 μL de tampón FACS para su análisis utilizando FACSAriaIII (BD Biosciences). El análisis de datos de citometría de flujo se realizó utilizando el software FACSDiva (BD Biosciences). Se registraron un mínimo de 20.000 eventos para cada muestra. Las células no teñidas se usaron como muestras de control para determinar la configuración adecuada para el análisis de datos.

El procedimiento experimental fue aprobado por el Comité de Cuidado de Animales de la Facultad de Medicina de Hyogo (número de aprobación: 19-040) y se realizó siguiendo las pautas ARRIVE y la "Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio" publicada por la Academia Nacional de Ciencias de EE.UU. Se alojaron ratones macho CB-17/Icr-+/+Jcl de siete a nueve semanas de edad (CLEA Japan Inc., Tokio, Japón) en una habitación con temperatura (22–24 °C) y humedad (55 %) controlada bajo un horario de 12/12 luz-oscuridad. Los animales tenían libre acceso a agua y pienso estándar de gránulos ad libitum.

Los ratones se asignaron aleatoriamente a tres grupos de la siguiente manera: el grupo UCB + OP9 (MCAO seguido de la administración de UCB preacondicionado con OP9; n = 11); el grupo de control (el grupo de control del vehículo al que se le administró solución de Ringer lactato sola después de la MCAO; n = 11), y el grupo de cirugía simulada (n = 12). Dos semanas después de la cirugía, los ratones del grupo UCB + OP9 recibieron 100 μl de UCB preacondicionado con OP9 (2,0 × 107 células/kg) y los ratones del grupo de control recibieron la misma cantidad de solución de Ringer lactato a través de la vena carótida bajo visión directa. .

El infarto cerebral focal permanente fue inducido por MCAO como se describió previamente40. Brevemente, bajo anestesia general con isoflurano al 2% (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, 099-06571; Osaka, Japón), se hizo una incisión en la piel entre el ojo izquierdo y la oreja izquierda. Después de extirpar el cigoma izquierdo con un taladro dental bajo un microscopio quirúrgico, se creó una ventana ósea de 1,5 mm de diámetro en la superficie del cráneo. Finalmente, la porción proximal de la arteria cerebral media se expuso cerca de la base del cráneo y se cortó justo distal al tracto olfatorio. Se sabe que este modelo de MCAO utilizado en el estudio actual tiene un área de accidente cerebrovascular reproducible claramente delimitada incluso en el período crónico (es decir, 14 días después de la inducción de MCAO)66.

No se administraron inmunosupresores porque se sabe que la UCB tiene baja inmunogenicidad y varios estudios han informado de injertos después de xenotrasplantes sin inmunosupresores20,67.

Tres meses después del trasplante de células, cinco ratones del grupo UCB + OP9 y cinco del grupo de control recibieron perfusión transcardiaca con PBS y paraformaldehído (PFA) al 4 % después de la anestesia general con isoflurano (FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation). Los cerebros se extrajeron y se fijaron durante la noche en PFA al 4 %, se deshidrataron en sacarosa al 30 %, se congelaron a -80 °C y se cortaron en secciones coronales de 10 μm usando un criostato (NX70; PHC, Tokio, Japón). Las secciones congeladas se lavaron tres veces con PBS durante 3 min cada una, se bloquearon con Blocking One Histo (Nacalai Tesque, 06349-64; Kyoto, Japón), se permeabilizaron con Triton X-100 al 1 % en PBS durante 10 min y se lavaron 2 veces con PBS durante 5 min cada uno. Luego, las secciones se incubaron durante la noche a 4 °C con un anticuerpo anti-CD31 (1:50; BioLegend, 160,202; San Diego, CA) y un anticuerpo anti-vWF (1:50; Cell Signaling Technologies, 65,707; Danvers, MAMÁ). Los anticuerpos conjugados con Alexa Fluor 488 y 647 (Thermo Fisher Scientific, SA5-10327; Cell Signaling Technologies, 4416) se usaron como anticuerpos secundarios para anticuerpos anti-CD31 y anti-vWF, respectivamente, y se incubaron a temperatura ambiente durante 2 h. Los núcleos se contrastaron con DAPI (SeraCare, 71-03-01; Milford, IA, EE. UU.). Las células doblemente positivas para CD31/vWF en la lesión periinfarto se reconocieron como células endoteliales formadoras de microvasos62,68,69,70. Las imágenes histológicas se capturaron con un microscopio de fluorescencia BZ-X710 (Keyence Corporation; Osaka, Japón) con un aumento de 400 × para medir el área doblemente positiva de CD31/vWF. Se analizaron quince campos por grupo (tres campos visuales aleatorios no superpuestos por sección coronal y una sección coronal por ratón; n = 5 en cada grupo). La medición del área y el recuento de células de estas células se realizaron automáticamente en cada imagen capturada utilizando el analizador BZ-X de software de recuento de células híbrido en cada campo visual (Keyence Corporation).

Un mes después del trasplante de células, se realizaron tareas de comportamiento (como se indica en el método complementario) para evaluar los déficits funcionales y la recuperación de los animales después de MCAO [el grupo UCB + OP9 (n = 11), el grupo control (n = 11) , y el grupo de cirugía simulada (n = 12)]. Con base en nuestro estudio anterior que utilizó el mismo modelo y tareas conductuales71, un análisis de poder pre-hoc determinó que un tamaño de muestra de diez en cada grupo es suficiente para tener un poder del 80% para detectar una diferencia entre sujetos entre tres grupos en mediciones repetidas. ANOVA para el campo abierto, el laberinto en Y y la prueba de aprendizaje de evitación pasiva. Las tareas conductuales fueron realizadas por experimentadores independientes, ciegos a los grupos experimentales. Se sabe que la hiperactividad anormal se observa en modelos de ratones después de un infarto cerebral focal y dura hasta 2 o 3 meses72,73, lo que es causado por una ansiedad anormal y un deterioro en la habituación después de una exposición repetida debido a una alteración de la memoria74. En nuestros modelos, estas anomalías de comportamiento debidas a MCAO pueden evaluarse utilizando la distancia de viaje en la prueba de campo abierto39. La fuerza muscular y la tolerancia al ejercicio se midieron mediante la latencia para caer en la prueba de suspensión del cable. La memoria de trabajo espacial y la memoria emocional condicionada por el miedo se evaluaron utilizando el Y-maze75 y las tareas de aprendizaje de evitación pasiva76, respectivamente. Finalmente, se evaluó la pérdida de motivación y la tolerancia al ejercicio mediante el test de natación forzada77. Anteriormente confirmamos el efecto de la inducción de MCAO en las puntuaciones del laberinto en Y y las tareas de aprendizaje de evitación pasiva en la fase crónica (es decir, 1 a 2 meses después de la inducción de MCAO)71.

Todos los datos se expresan como media ± error estándar de la media (SEM) y se analizan utilizando JMP ver. 13 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EE. UU.). Las diferencias entre dos grupos se analizaron mediante una prueba t de dos colas no pareada, mientras que el análisis en más de dos grupos o en valores medidos repetidamente se realizó mediante la prueba post-hoc de Dunnett cuando ANOVA unidireccional o rmANOVA mostró significación estadística. Al realizar la prueba de Dunnett, el grupo control y la sesión inicial se establecieron como control para las comparaciones entre grupos y para el análisis de las diferencias sesión por sesión dentro del sujeto, respectivamente. La significación estadística se fijó en p < 0,05.

Los autores confirman que todos los datos subyacentes a los hallazgos están completamente disponibles sin restricciones. Los conjuntos de datos utilizados y/o analizados durante el estudio actual están disponibles del autor correspondiente a pedido razonable.

Los datos de scRNA-seq se depositaron en NCBI GEO con el número de acceso GSE207249.

Goyal, M. et al. Trombectomía endovascular después de un accidente cerebrovascular isquémico de grandes vasos: un metanálisis de datos de pacientes individuales de cinco ensayos aleatorios. The Lancet 387, 1723-1731. https://doi.org/10.1016/s0140-6736(16)00163-x (2016).

Artículo Google Académico

Song, CG et al. Células madre: un candidato prometedor para tratar trastornos neurológicos. Regeneración Neural. Res. 13, 1294–1304. https://doi.org/10.4103/1673-5374.235085 (2018).

Artículo Google Académico

Stonesifer, C. et al. Terapia con células madre para anular la neuroinflamación inducida por accidente cerebrovascular y los mecanismos secundarios de muerte celular relevantes. prog. Neurobiol. 158, 94–131. https://doi.org/10.1016/j.pneurobio.2017.07.004 (2017).

Artículo Google Académico

Hristov, M., Erl, W. & Weber, PC Células progenitoras endoteliales: movilización, diferenciación y localización. Arteriosclera. trombo. vasco Biol. 23, 1185–1189. https://doi.org/10.1161/01.ATV.0000073832.49290.B5 (2003).

Artículo Google Académico

Janic, B. et al. Las células progenitoras AC133+ derivadas de la sangre del cordón umbilical humano conservan las características progenitoras endoteliales después de una expansión in vitro a largo plazo. PLoS One 5, e9173. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0009173 (2010).

Artículo ANUNCIOS Google Académico

Asahara, T. et al. Aislamiento de células endoteliales progenitoras putativos para la angiogénesis. Ciencia 275, 964–967. https://doi.org/10.1126/science.275.5302.964 (1997).

Artículo Google Académico

Kalka, C. et al. Trasplante de células progenitoras endoteliales expandidas ex vivo para la neovascularización terapéutica. proc. nacional Academia ciencia EE. UU. 97, 3422–3427. https://doi.org/10.1073/pnas.97.7.3422 (2000).

Artículo ANUNCIOS Google Académico

Timmermans, F. et al. Las células de crecimiento endotelial no se derivan de células CD133+ ni de precursores hematopoyéticos CD45+. Arteriosclera. trombo. vasco Biol. 27, 1572–1579. https://doi.org/10.1161/ATVBAHA.107.144972 (2007).

Artículo Google Académico

Harraz, M., Jiao, C., Hanlon, HD, Hartley, RS y Schatteman, GC Progenitores de células endoteliales humanas derivadas de sangre CD34. Células madre 19, 304–312. https://doi.org/10.1634/stemcells.19-4-304 (2001).

Artículo Google Académico

Schmeisser, A. et al. Los monocitos coexpresan marcadores de linaje endotelial y macrofagocítico y forman estructuras similares a cordones en Matrigel en condiciones angiogénicas. Cardiovasc. Res. 49, 671–680. https://doi.org/10.1016/s0008-6363(00)00270-4 (2001).

Artículo Google Académico

Wara, AK et al. Los CMP y GMP derivados de la médula ósea representan células proangiogénicas altamente funcionales: implicaciones para la enfermedad cardiovascular isquémica. Sangre 118, 6461–6464. https://doi.org/10.1182/blood-2011-06-363457 (2011).

Artículo Google Académico

Medina, RJ et al. Las células angiogénicas mieloides actúan como macrófagos M2 alternativos y modulan la angiogénesis a través de la interleucina-8. mol. Medicina. 17, 1045–1055. https://doi.org/10.2119/molmed.2011.00129 (2011).

Artículo Google Académico

Hu, X. et al. Polarización microglial y de macrófagos: nuevas perspectivas para la reparación del cerebro. Nat. Rev. Neurol. 11, 56–64. https://doi.org/10.1038/nrneurol.2014.207 (2015).

Artículo Google Académico

Urbich, C. & Dimmeler, S. Células progenitoras endoteliales: Caracterización y papel en la biología vascular. Circ. Res. 95, 343–353. https://doi.org/10.1161/01.RES.0000137877.89448.78 (2004).

Artículo Google Académico

Janic, B. & Arbab, AS Células progenitoras endoteliales de sangre de cordón umbilical como sondas terapéuticas y de imagen. Imagenología Med. 4, 477–490. https://doi.org/10.2217/iim.12.35 (2012).

Artículo Google Académico

Kanazawa, M. et al. Angiogénesis en el núcleo isquémico: ¿una posible diana de tratamiento?. J. Cereb. Metab. del flujo sanguíneo. 39, 753–769. https://doi.org/10.1177/0271678X19834158 (2019).

Artículo Google Académico

Yan, T. et al. Terapia neurorreparadora del accidente cerebrovascular en ratas con diabetes mellitus tipo 2 tratadas con células de sangre de cordón umbilical humano. Trazo 46, 2599–2606. https://doi.org/10.1161/STROKEAHA.115.009870 (2015).

Artículo Google Académico

Huang, L. et al. El trasplante intraarterial de células mononucleares de sangre del cordón umbilical humano en el accidente cerebrovascular hiperagudo mejora la función vascular. Célula madre. Res. El r. 8, 74. https://doi.org/10.1186/s13287-017-0529-y (2017).

Artículo Google Académico

Hwang, S., Choi, J. y Kim, M. La combinación de células sanguíneas del cordón umbilical humano con eritropoyetina mejora la angiogénesis/neurogénesis y la recuperación del comportamiento después de un accidente cerebrovascular. Frente. Neurol. 10, 357. https://doi.org/10.3389/fneur.2019.00357 (2019).

Artículo Google Académico

Chen, J. et al. La administración intravenosa de sangre de cordón umbilical humano reduce los déficits de comportamiento después de un accidente cerebrovascular en ratas. Trazo 32, 2682–2688. https://doi.org/10.1161/hs1101.098367 (2001).

Artículo Google Académico

Boltze, J. et al. Evaluación de los efectos neuroprotectores de subpoblaciones de células mononucleares de sangre de cordón umbilical humano in vitro e in vivo. Trasplante de células. 21, 723–737. https://doi.org/10.3727/096368911X586783 (2012).

Artículo Google Académico

Nystedt, J., Makinen, S., Laine, J. & Jolkkonen, J. Células CD34+ de sangre de cordón umbilical humano y recuperación conductual después de isquemia cerebral focal en ratas. Acta Neurobiol. Exp. (Guerras.) 66, 293–300 (2006).

Google Académico

Nakano, T., Kodama, H. & Honjo, T. Generación de células linfohematopoyéticas a partir de células madre embrionarias en cultivo. Ciencia 265, 1098–1101. https://doi.org/10.1126/science.8066449 (1994).

Artículo ANUNCIOS Google Académico

Hamaguchi, I. et al. Desarrollo de células hematopoyéticas y endoteliales in vitro a partir de células que expresan el receptor TEK en la región murina de aorta-gónada-mesonefros. Sangre 93, 1549-1556. https://doi.org/10.1182/blood.V93.5.1549 (1999).

Artículo Google Académico

Naito, H., Kidoya, H., Sakimoto, S., Wakabayashi, T. & Takakura, N. Identificación y caracterización de una población de células madre/progenitoras vasculares residentes en vasos sanguíneos preexistentes. EMBO J. 31, 842–855. https://doi.org/10.1038/emboj.2011.465 (2012).

Artículo Google Académico

Ingram, DA et al. Identificación de una nueva jerarquía de células progenitoras endoteliales utilizando sangre periférica humana y del cordón umbilical. Sangre 104, 2752–2760. https://doi.org/10.1182/blood-2004-04-1396 (2004).

Artículo Google Académico

Hur, J. et al. Caracterización de dos tipos de células progenitoras endoteliales y sus diferentes contribuciones a la neovasculogénesis. Arteriosclera. trombo. vasco Biol. 24, 288–293. https://doi.org/10.1161/01.ATV.0000114236.77009.06 (2004).

Artículo Google Académico

Caso, J. et al. Las células CD34+AC133+VEGFR-2+ humanas no son células progenitoras endoteliales sino progenitores hematopoyéticos primitivos distintos. Exp. hematol. 35, 1109–1118. https://doi.org/10.1016/j.exphem.2007.04.002 (2007).

Artículo Google Académico

Medina, RJ, O'Neill, CL, Humphreys, MW, Gardiner, TA & Stitt, AW Células endoteliales derivadas: Caracterización y su potencial para revertir la retinopatía isquémica. Invertir. Oftalmol. Vis. ciencia 51, 5906–5913. https://doi.org/10.1167/iovs.09-4951 (2010).

Artículo Google Académico

Muraille, E., Leo, O. & Moser, M. Paradigma TH1/TH2 extendido: ¿La polarización de los macrófagos como un mecanismo de escape impulsado por patógenos desapreciado?. Frente. inmunol. 5, 603. https://doi.org/10.3389/fimmu.2014.00603 (2014).

Artículo Google Académico

Zacchigna, S. et al. Las células de la médula ósea reclutadas a través del receptor de neuropilina-1 promueven la formación arterial en los sitios de neoangiogénesis adulta en ratones. J. Clin. Invertir. 118, 2062–2075. https://doi.org/10.1172/JCI32832 (2008).

Artículo Google Académico

Bertani, FR et al. Clasificación de macrófagos humanos polarizados M1/M2 mediante microscopía confocal de reflectancia hiperespectral sin etiquetas y análisis multivariante. ciencia Rep. 7, 8965. https://doi.org/10.1038/s41598-017-08121-8 (2017).

Artículo ANUNCIOS Google Académico

De Sousa, JR, Da Costa Vasconcelos, PF & Quaresma, JAS Aspectos funcionales, heterogeneidad fenotípica y respuesta inmune tisular de macrófagos en enfermedades infecciosas. Infectar. Resistencia a las drogas. 12, 2589–2611. https://doi.org/10.2147/IDR.S208576 (2019).

Artículo Google Académico

Cuartoro, MI et al. Neutrófilos N2, nuevos jugadores en la inflamación cerebral después de un accidente cerebrovascular: modulación por el agonista de PPARgamma rosiglitazona. Trazo 44, 3498–3508. https://doi.org/10.1161/STROKEAHA.113.002470 (2013).

Artículo Google Académico

Hayashi, T., Noshita, N., Sugawara, T. & Chan, PH Perfil temporal de angiogénesis y expresión de genes relacionados en el cerebro después de la isquemia. J. Cereb. Metab. del flujo sanguíneo. 23, 166–180. https://doi.org/10.1097/01.WCB.0000041283.53351.CB (2003).

Artículo Google Académico

Huang, Q. et al. Los patrones de expresión temporal de la fibronectina y sus receptores-integrinas alfa5beta1 y alfavbeta3 en los vasos sanguíneos después de la isquemia cerebral. Restaurar Neurol. Neurosci. 33, 493–507. https://doi.org/10.3233/RNN-140491 (2015).

Artículo Google Académico

Yu, SW, Friedman, B., Cheng, Q. & Lyden, PD La angiogénesis provocada por un accidente cerebrovascular da como resultado una población transitoria de microvasos. J. Cereb. Metab. del flujo sanguíneo. 27, 755–763. https://doi.org/10.1038/sj.jcbfm.9600378 (2007).

Artículo Google Académico

Tang, Y. et al. La angiogénesis inducida por isquemia se atenúa en ratas de edad avanzada. Envejecimiento Dis. 7, 326–335. https://doi.org/10.14336/AD.2015.1125 (2016).

Artículo Google Académico

Taguchi, A. et al. El factor estimulante de colonias de granulocitos tiene un efecto negativo sobre el resultado del accidente cerebrovascular en un modelo murino. EUR. J. Neurosci. 26, 126–133. https://doi.org/10.1111/j.1460-9568.2007.05640.x (2007).

Artículo Google Académico

Taguchi, A. et al. Un modelo simple y reproducible de isquemia cerebral permanente en ratones CB-17 y SCID. Exp. J. Traducción de trazo Medicina. 3, 28–33. https://doi.org/10.6030/1939-067x-3.1.28 (2010).

Artículo Google Académico

Yoder, MC Definición de células progenitoras endoteliales humanas. J. Trombo. Hemost. 7 (Suplemento 1), 49–52. https://doi.org/10.1111/j.1538-7836.2009.03407.x (2009).

Artículo Google Académico

Medina, RJ et al. Progenitores endoteliales: una declaración de consenso sobre la nomenclatura. Traducción de células madre. Medicina. 6, 1316–1320. https://doi.org/10.1002/sctm.16-0360 (2017).

Artículo Google Académico

Yoon, CH et al. Neovascularización sinérgica por trasplante mixto de células progenitoras endoteliales tempranas y células endoteliales de crecimiento tardío: el papel de las citocinas angiogénicas y las metaloproteinasas de matriz. Circulación 112, 1618–1627. https://doi.org/10.1161/CIRCULATIONAHA.104.503433 (2005).

Artículo Google Académico

Medina, RJ et al. El análisis molecular de los subtipos de células progenitoras endoteliales (EPC) revela dos poblaciones celulares distintas con identidades diferentes. BMC Med. Genómica 3, 18. https://doi.org/10.1186/1755-8794-3-18 (2010).

Artículo Google Académico

Yoder, MC et al. Redefinición de células progenitoras endoteliales a través de análisis clonales y principios de células madre/progenitoras hematopoyéticas. Sangre 109, 1801–1809. https://doi.org/10.1182/blood-2006-08-043471 (2007).

Artículo Google Académico

Urbich, C. et al. Relevancia de las características monocíticas para la capacidad de neovascularización de las células progenitoras endoteliales circulantes. Circulación 108, 2511–2516. https://doi.org/10.1161/01.CIR.0000096483.29777.50 (2003).

Artículo Google Académico

Gammaitoni, L. et al. Actividad elevada de la telomerasa y pérdida mínima de telómeros en cultivos a largo plazo de sangre de cordón umbilical con replicación extensa de células madre. Sangre 103, 4440–4448. https://doi.org/10.1182/blood-2003-09-3079 (2004).

Artículo Google Académico

Murohara, T. et al. Las células precursoras endoteliales derivadas de la sangre del cordón umbilical trasplantadas aumentan la neovascularización posnatal. J. Clin. Invertir. 105, 1527–1536. https://doi.org/10.1172/JCI8296 (2000).

Artículo Google Académico

Madlambayan, G. & Rogers, I. Células madre derivadas del cordón umbilical para la terapia tisular: usos actuales y futuros. regeneración Medicina. 1, 777–787. https://doi.org/10.2217/17460751.1.6.777 (2006).

Artículo Google Académico

Ballen, KK, Gluckman, E. & Broxmeyer, HE Trasplante de sangre de cordón umbilical: Los primeros 25 años y más allá. Sangre 122, 491–498. https://doi.org/10.1182/blood-2013-02-453175 (2013).

Artículo Google Académico

Cohen, Y. & Nagler, A. Trasplante de sangre de cordón umbilical: ¿cómo, cuándo y para quién?. Sangre Rev. 18, 167–179. https://doi.org/10.1016/s0268-960x(03)00064-x (2004).

Artículo Google Académico

Riordan, NH, Chan, K., Marleau, AM & Ichim, TE Sangre de cordón umbilical en medicina regenerativa: ¿Necesitamos inmunosupresión?. J. traducción Medicina. 5, 8. https://doi.org/10.1186/1479-5876-5-8 (2007).

Artículo Google Académico

Kim, J. & Hematti, P. Macrófagos educados con células madre mesenquimales: un nuevo tipo de macrófagos activados alternativamente. Exp. hematol. 37, 1445–1453. https://doi.org/10.1016/j.exphem.2009.09.004 (2009).

Artículo Google Académico

Cantu, DA, Hematti, P. & Kao, WJ El biomaterial encapsulante de células regula la diferenciación de células madre/estromales mesenquimales y el inmunofenotipo de macrófagos. Traducción de células madre. Medicina. 1, 740–749. https://doi.org/10.5966/sctm.2012-0061 (2012).

Artículo Google Académico

Selleri, S. et al. El lactato secretado por células del estroma mesenquimatoso humano induce la diferenciación de macrófagos M2 mediante reprogramación metabólica. Oncotarget 7, 30193–30210. https://doi.org/10.18632/oncotarget.8623 (2016).

Artículo Google Académico

Chamberlain, CS et al. Los macrófagos educados en vesículas extracelulares promueven la curación temprana del tendón de Aquiles. Células madre 37, 652–662. https://doi.org/10.1002/stem.2988 (2019).

Artículo Google Académico

Gao, J. et al. Caracterización de OP9 como auténtica línea de células madre mesenquimales. J. Genet. Genómica 37, 475–482. https://doi.org/10.1016/s1673-8527(09)60067-9 (2010).

Artículo Google Académico

Choi, KD, Vodyanik, MA & Slukvin, II Generación de células mielomonocíticas humanas maduras a través de la expansión y diferenciación de progenitores lin-CD34+CD43+CD45+ derivados de células madre pluripotentes. J. Clin. Invertir. 119, 2818–2829. https://doi.org/10.1172/JCI38591 (2009).

Artículo Google Académico

Zentilin, L. et al. Las células mononucleares de la médula ósea se reclutan en los sitios de neovascularización inducida por VEGF, pero no se incorporan a los vasos recién formados. Sangre 107, 3546–3554. https://doi.org/10.1182/blood-2005-08-3215 (2006).

Artículo Google Académico

Carrer, A. et al. La neuropilina-1 identifica un subconjunto de monocitos Gr1- de la médula ósea que pueden inducir la normalización de los vasos tumorales e inhibir el crecimiento tumoral. Cáncer Res. 72, 6371–6381. https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-12-0762 (2012).

Artículo Google Académico

Groppa, E. et al. La dosis de VEGF regula la estabilización vascular a través de la semaforina 3A y el eje paracrino neuropilina-1+ monocitos/TGF-beta1. EMBOmol. Medicina. 7, 1366–1384. https://doi.org/10.15252/emmm.201405003 (2015).

Artículo Google Académico

Iskander, A. et al. La administración intravenosa de células progenitoras endoteliales AC133+ derivadas de la sangre del cordón umbilical humano en un modelo de accidente cerebrovascular en ratas reduce el volumen del infarto: resonancia magnética y hallazgos histológicos. Traducción de células madre. Medicina. 2, 703–714. https://doi.org/10.5966/sctm.2013-0066 (2013).

Artículo Google Académico

Shichita, T. et al. Papel fundamental de las células gammadeltaT productoras de interleucina-17 cerebrales en la fase tardía de la lesión cerebral isquémica. Nat. Medicina. 15, 946–950. https://doi.org/10.1038/nm.1999 (2009).

Artículo Google Académico

Ou, Y. et al. La infusión intravenosa de células CD34+ de sangre del cordón umbilical humano modificadas con el gen GDNF protege contra la lesión isquémica cerebral en ratas espontáneamente hipertensas. Res. cerebral. 1366, 217–225. https://doi.org/10.1016/j.brainres.2010.09.098 (2010).

Artículo Google Académico

Cui, X. et al. Beneficio terapéutico del tratamiento del accidente cerebrovascular con simvastatina y células sanguíneas del cordón umbilical humano: neurogénesis, plasticidad sináptica y crecimiento de axones. Trasplante de células. 21, 845–856. https://doi.org/10.3727/096368911X627417 (2012).

Artículo Google Académico

Taguchi, A. et al. La administración de células CD34+ después de un accidente cerebrovascular mejora la neurogénesis a través de la angiogénesis en un modelo de ratón. J. Clin. Invertir. 114, 330–338. https://doi.org/10.1172/JCI20622 (2004).

Artículo Google Académico

Park, DH et al. Injertos de células sanguíneas del cordón umbilical humano para la isquemia cerebral. Trasplante de células. 18, 985–998. https://doi.org/10.3727/096368909X471279 (2009).

Artículo Google Académico

Xia, Y. et al. Pequeñas vesículas extracelulares secretadas por MSC derivadas de iPSC humanas mejoran la angiogénesis mediante la inhibición de la autofagia dependiente de STAT3 en el accidente cerebrovascular isquémico. Célula madre. Res. El r. 11, 313. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01834-0 (2020).

Artículo Google Académico

Hicks, C. et al. Caracterización in vivo e in vitro del efecto angiogénico de las células madre neurales humanas CTX0E03. Trasplante de células. 22, 1541–1552. https://doi.org/10.3727/096368912X657936 (2013).

Artículo Google Académico

Huang, H., Huang, Q., Wang, F., Milner, R. y Li, L. La angiogénesis inducida por isquemia cerebral depende de la regulación positiva mediada por el receptor 1 del factor de necrosis tumoral de las integrinas alfa5beta1 y alfaVbeta3. J. Neuroinflam. 13, 227. https://doi.org/10.1186/s12974-016-0697-1 (2016).

Artículo Google Académico

Yoshida, Y. et al. La administración intravenosa de células madre mesenquimatosas amnióticas humanas en la fase subaguda del infarto cerebral en un modelo de ratón mejora los trastornos neurológicos al suprimir la alteración de la barrera hematoencefálica y la apoptosis mediante inmunomodulación. Trasplante de células. 30, 9636897211024184. https://doi.org/10.1177/09636897211024183 (2021).

Artículo Google Académico

Invierno, B. et al. Fenotipo ansioso e hiperactivo después de breves episodios isquémicos en ratones. Biol. Psiquiatría 57, 1166–1175. https://doi.org/10.1016/j.biopsych.2005.02.010 (2005).

Artículo Google Académico

Tatebayashi, K. et al. La terapia con células madre derivadas de tejido adiposo inhibe el deterioro del infarto cerebral al alterar la cinética de los macrófagos. Res. cerebral. 1712, 139–150. https://doi.org/10.1016/j.brainres.2019.01.037 (2019).

Artículo Google Académico

Balkaya, M., Krober, JM, Rex, A. y Endres, M. Evaluación del comportamiento posterior al accidente cerebrovascular en modelos de isquemia focal en ratones. J. Cereb. Metab. del flujo sanguíneo. 33, 330–338. https://doi.org/10.1038/jcbfm.2012.185 (2013).

Artículo Google Académico

Hazane, F., Krebs, MO, Jay, TM y Le Pen, G. Perturbaciones del comportamiento después de la alteración de la neurogénesis prenatal en ratas hembra. neurotoxicidad. Res. 15, 311–320. https://doi.org/10.1007/s12640-009-9035-z (2009).

Artículo Google Académico

Stubley-Weatherly, L., Harding, JW y Wright, JW Efectos de lesiones discretas del hipocampo inducidas por ácido kaínico sobre el aprendizaje espacial y contextual y la memoria en ratas. Res. cerebral. 716, 29–38. https://doi.org/10.1016/0006-8993(95)01589-2 (1996).

Artículo Google Académico

Can, A. et al. La prueba de natación forzada del ratón. J. Vis. Exp. https://doi.org/10.3791/3638 (2012).

Artículo Google Académico

Descargar referencias

Los autores agradecen a los Dres. Mariko Kamihigashi, Hiroyuki Tanaka, Hideaki Sawai e Hiroaki Shibahara, departamento de obstetricia y ginecología de la Universidad Médica de Hyogo por preparar sangre de cordón umbilical humano. Los autores también agradecen al personal de las instalaciones de investigación de uso conjunto de la Universidad Médica de Hyogo por permitirnos utilizar sus recursos, incluido el analizador FACS. Agradecemos a la instalación central de NGS del Centro de Investigación de Información del Genoma en el Instituto de Investigación de Enfermedades Microbianas de la Universidad de Osaka y Genble Inc. por el apoyo en la secuenciación de ARN y el análisis de datos.

Este trabajo fue apoyado por JSPS KAKENHI Grant-in-Aid for Scientific Research (C) [Número de subvención JP22K09221].

Estos autores contribuyeron por igual: Yasunori Yoshida y Yuki Takeda.

Departamento de Neurocirugía, Universidad Médica de Hyogo, 1-1 Mukogawa, Nishinomiya, Hyogo, 663-8501, Japón

Yasunori Yoshida, Yuki Takeda, Toshinori Takagi, Yoji Kuramoto y Shinichi Yoshimura

Laboratorio de Terapia Molecular y Celular, Instituto de Ciencias Médicas Avanzadas, Universidad Médica de Hyogo, 1-1 Mukogawa, Nishinomiya, Hyogo, 663-8501, Japón

Kenichi Yamahara y Hanae Yamamoto

Laboratorio de Neurogénesis y Reparación del SNC, Instituto de Ciencias Médicas Avanzadas, Universidad de Hyogo Medial, 1-1 Mukogawa, Nishinomiya, Hyogo, 663-8501, Japón

Akiko Nakano-Doi, Takayuki Nakagomi y Nobutaka Doe

Departamento de Terapia Ocupacional, Escuela de Rehabilitación, Universidad Médica de Hyogo, 1-3-6 Minatojima, Chuo-Ku, Kobe, Hyogo, 650-8530, Japón

Nobutaka Doe

Departamento de Hematología, Universidad Médica de Hyogo, 1-1 Mukogawa, Nishinomiya, Hyogo, 663-8501, Japón

Toshihiro Soma

Departamento de Progreso Terapéutico en Enfermedades Cerebrales, Universidad Médica de Hyogo, 1-1 Mukogawa, Nishinomiya, Hyogo, 663-8501, Japón

tomohiro matsuyama

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YT realizó experimentos. YY analizó e interpretó los datos y redactó el manuscrito. HY y AD hicieron contribuciones sustanciales a la realización de experimentos. TN, TS y TM participaron en el diseño experimental y la interpretación de datos. ND y YK hicieron contribuciones sustanciales al análisis de las tareas de comportamiento. TT y KY revisaron el manuscrito. SY hizo contribuciones sustanciales a la concepción y el diseño del estudio. KY analizó e interpretó los datos con YY, aprobó la versión final del artículo que se publicará y acordó ser responsable de todos los aspectos del trabajo. Todos los autores han leído y aprobado el manuscrito final.

Correspondencia a Kenichi Yamahara.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Yoshida, Y., Takeda, Y., Yamahara, K. et al. Las propiedades angiogénicas mejoradas de la sangre del cordón umbilical preparadas con células estromales OP9 mejoran los déficits neurológicos en un modelo de ratón con infarto cerebral. Informe científico 13, 262 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-27424-7

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Recibido: 15 Septiembre 2022

Aceptado: 29 de diciembre de 2022

Publicado: 06 enero 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-27424-7

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